透明质酸纳米凝胶作为蛋白质传递系统
目的
透明质酸纳米凝胶主链上有透明质酸，是一种亲水性、生物相容性低毒性材料，侧链上有疏水基团。由于其亲疏水相互作用，纳米有序凝胶会自发形成，在这种相互作用中，可以装载小分子、多肽和蛋白质。(1,2)预测其独特的特性，如提高靶向能力，降低毒性和活性药物成分的溶解度。
HA纳米凝胶可负载多种蛋白质;然而，蛋白质的理化性质与负载能力之间的关系尚未被研究。为了探索HA纳米凝胶-蛋白复合物制剂的功能，我们以胆固醇修饰透明质酸(CHHA)为纳米凝胶，研究了蛋白质活性的稳定性、对聚集和变性的抑制作用。
目标
为了了解蛋白质与HA纳米凝胶之间的相互作用，考察了纳米凝胶封装时TSA分析与负载能力的关系，以及对蛋白质聚集和活性的影响。本研究有助于开发蛋白质稳定性高的制剂。
方法
在本研究中，我们使用的CHHA，其被胆固醇基取代度为12%的HA单位，其分子量为80 kDa。
HA纳米凝胶/hGH复合物体内hGH的持续释放
将CHHA溶液和hGH溶液在10wt%蔗糖中混合成不同浓度，在37C下孵育24小时。CHHA/hGH制剂用25号针头皮下注射到7周大的男性Sprague-Dawley的背部，剂量见图1。从颈静脉采血，使用hGH酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定血浆中rhGH水平。
TSA(热转移分析)分析
将SYPRO®橙色蛋白凝胶染色(稀释50倍，1 μL)加入蛋白溶液(0.151 mg/mL, 19μL)中。采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测荧光强度，荧光定量分析(FRET)扫描方式。
在HA纳米凝胶中装载蛋白质
蛋白与CHHA在37℃孵育24小时([Protein] = [CHHA] = 1 mg/mL)，然后将该溶液(200 μL)放入×5 PBS缓冲液(50 μL)中沉淀CHHA与蛋白的复合物。9000g离心10 min后，取上清液中的蛋白进行GPC测定，以确定包被蛋白的量。蛋白的承载能力=[包被蛋白量]/ [CHHA量]。
HA纳米凝胶中的抗体稳定性
抗体(兔抗ova抗体、兔IgG)加入或不加入CHHA，在4℃或80℃孵育24 h([抗体]= 4 μg/mL， [HA纳米凝胶]= 6 mg/mL)，用读板仪测定od值，以评价HA纳米凝胶中抗体的热稳定性。
文章信息:胜俣恒久，fumoto Keisuke, Kohei Yabuuchi, Yoshiyuki Nakagawa, yoshio Tahara, Yurika Tanaka, Tsuyoshi Shimoboji。所提供的透